Thermo Fisher Scientific – мировой лидер в производстве реагентов для молекулярной биологии. Обзор

Продукты для молекулярной биологии Thermo FS разработаны для обеспечения воспроизводимости и производительности в повседневных применениях, включая очистку и выделение нуклеиновых кислот, обратную транскрипцию, ПЦР, прямую ПЦР, электрофорез нуклеиновых кислот, гидролиз эндонуклеазами рестрикции и клонирование. В портфолио компании входят реагенты, обеспечивающие весь спектр молекулярно-биологических применений, начиная от выделения нуклеиновой кислоты до клонирования.

	Invitrogen – бренд с мировой известностью. Под маркой Invitrogen производятся уникальные продукты высочайшего качества для исследований в области молекулярной биологии: обратные транскриптазы SuperScript. Более 50 000 цитат, обзоров и публикаций показали, что обратные транскриптазы SuperScript являются превосходным выбором для многих исследовательских приложений. Обратная транскриптаза SuperScript IV обеспечивает лучшие результаты синтеза кДНК, чем другие ферменты в деградированных и сложных образцах в присутствие ингибиторов всего за 10 мин. ДНК-полимераза Platinum II Taq Hot Start – обеспечивает универсальную температуру отжига 60 0С для разных пар праймеров, быстрый синтез ДНК и устойчивость к ингибиторам. наборы для клонирования TOPO, Invitrogen являются самыми быстрыми, простыми и эффективными решениями для клонирования; реагент TRIzol для выделения высококачественной неповрежденной РНК из разнообразных образцов, упоминается в тысячах научных публикаций, что отражает высокое качество и удобство использования реагента; раствор для стабилизации РНК RNAlater стабилизирует и защищает клеточную РНК в интактных, размороженных образцах тканей, устраняя необходимость немедленной обработки образцов тканей или замораживания образцов в жидком азоте для последующей обработки.
	Thermo Scientific – один из нескольких брендов входящих в состав Thermo FS. Линия продуктов данного бренда включает известные во всем мире реактивы, ранее производимые под маркой Fermentas. ДНК-полимераза Phusion – фермент, на который ссылаются в тысячах научных публикаций, позволяет синтезировать ПЦР-продукты с очень высокой точностью, чувствительностью и специфичностью. Фермент используют для применений, требующих высокой точности во время амплификации ДНК, таких как клонирование, секвенирование или мутагенез. Эндонуклеазы рестрикции FastDigest для ускоренного гидролиза – 176 разных эндонуклеаз рестрикции позволяют проводить реакцию за 5-15 минут и обладают 100% активностью в одном универсальном буфере, который также совместим со всеми широко используемыми приложениями в молекулярной биологии.
	Applied Biosystems – под маркой данного бренда производят наборы, реактивы и оборудование для генетического анализа. Амплификаторы Applied Biosystems надежные, точные и удобные в использовании приборы, имеющие технологию температурного контроля VeriFlex, с помощью которой оптимизация подбора праймеров проходит более быстро и точно, а также позволяют получить воспроизводимые результаты для каждой задачи, применения и бюджета.

• реактивы и наборы для выделения ДНК и РНК;
• реактивы для стабилизации РНК;
• наборы и реактивы для обратной транскрипции;
• наборы, реактивы и оборудование для ПЦР;
• наборы и мастер-миксы для прямой ПЦР;
• реактивы и оборудование для проведения гель-электрофореза ( агарозы, маркеры длин НК, готовые гели, оборудование для проведения электрофореза и системы визуализации);
• наборы и ферменты для клонирования;
• стандартные эндонуклеазы рестриции;
• эндонуклеазы рестриции для быстрого гидролиза.

Реагенты и наборы для выделения и очистки ДНК

ThermoFS производит широкий спектр наборов для выделения и очистки геномной, плазмидной и вирусной ДНК из разнообразных образцов, включая ткани, клетки, кровь, сыворотку, растения, криминалистические образцы, очистка из реакционных смесей и выделение из агарозных гелей.

• Реагенты семейства DNAzol, Invitrogen - готовые к использованию реагенты для выделения геномной ДНК из твердых и жидких образцов животного, растительного, бактериального происхождения, грибов, бактерий, вирусов и дрожжей.

• DNAzol выделение из твердых и жидких образцов животного, растительного, дрожжевого и бактериального происхождения;
• DNAzol BD выделение из цельной крови;
• Plant DNAzol
• Выделение из растений.

• наборы PureLink, Invitrogen и GeneJET, Thermo Scientific (ранее производимых под маркой Fermentas) для выделения ДНК из широкого спектра образцов. В наборах используется запатентованная мембранная технология на основе диоксида кремния в форме удобных спин-колонок.
• набор PureLink Genomic DNA, Invitrogen в формате 96-луночного планшета для выделения ДНК для обеспечения высокой пропускной способности.

Реагент DNAzol для выделения геномной ДНК

Принцип действия реагента DNAzol

Принцип действия наборов PureLink

Принцип действия набора PureLink Genomic DNA в формате 96-луночного планшета

Реагенты и наборы для выделения РНК

Выделение высококачественной, чистой, и неповрежденной РНК необходимо для многих экспериментов, например таких как ОТ-ПЦР, ОТ-кПЦР, Нозерн-блоттинг, секвенирование РНК. Thermo FS предлагает реактивы и наборы для получения высококачественной РНК основанные на различных методах: от органической экстракции до спин-колонок и магнитных частиц.

• Реагенты и наборы на основе органической экстракции семейства TRIzol, Invitrogen для выделения высококачественной неповрежденной РНК из разнообразных биологических материалов:

• TRIzol - выделение из тканей, клеток дрожжей, растений;
• TRIzol LS выделение из крови, плазмы, вирусов;
• TRIzol Plus RNA purification kit выделение из бактерий, крови, клеток, растений, тканей (включая жир, мозг и хрящи), вирусные образцы, дрожжи;
• TRIzol Max Bacterial RNA isolation kit– выделение из бактерий.

• Пробирки Phasemaker tubes, Invitrogen - дополнение к реагентам семейства TRIzol. Использование реагентов TRIzol стало проще, благодаря пробиркам Phasemaker. В пробирках содержится гель, который создает плотный слой между водной и органической фазой, позволяя легко отобрать водную фазу содержащую РНК, что на 30% увеличивает выход РНК.
• Система для очистки РНК содержащая набор TRIzol Plus RNA Purification и пробирки Phasemaker.
• наборы PureLink, Invitrogen и GeneJET, Thermo Scientific в форме спин-колонок для выделения РНК из широкого спектра образцов.

Реагент TRIzol LS для выделения РНК из крови, плазмы, вирусов

Выделение РНК с помощью реагента TRIzol

Реагент TRIzol и пробирки Phasemaker

Выделение РНК с помощью реагента TRIzol и пробирок Phasemaker

Набор для выделения РНК TRIzol Plus

Очистка ПЦР-продуктов из реакционных смесей и выделение ДНК из гелей

Очистка ПЦР-смесей и выделение ДНК из агарозного геля является обычной, но трудоемкой лабораторной процедурой. Thermo FS предлагает наборы для простой и быстрой очистки ДНК из ПЦР-смеси и из агарозных гелей менее чем за 30 минут.

• Набор PureLink PCR Purification, Invitrogen для очистки ПЦР-продуктов из реакционной смеси;
• набор PureLink Quick Gel Extraction, Invitrogen для быстрого и эффективного выделения фрагментов ДНК из агарозных гелей различного процента;
• набор PureLink Quick Gel Extraction and PCR Purification Combo, Invitrogen обеспечивает возможность выполнения как экстракции фрагментов ДНК из геля, так и очистки ПЦР-фрагментов в одном наборе.

Наборы PureLink для очистки ДНК из ПЦР-смеси эффективно удаляют короткие праймеры, невключенные dNTPs, ферменты, короткие неспецифические продукты ПЦР и соли. Наборы PureLink для выделения фрагментов ДНК из агарозных гелей позволяют быстро и эффективно очищать фрагменты ДНК из агарозы различного процента в течение 30 минут. Выделенная ДНК готова к использованию в различных последующих приложениях, включая секвенирование ДНК, ПЦР, транскрипцию, гидроз эндогнуклеазами рестрикции, клонирования.

Выделение ДНК и РНК с использованием магнитных частиц

Наборы для выделения ДНК и РНК на магнитных частицах MagMAX, Applied Biosystems и Dynabeads, Invitrogen обеспечивают наилучший баланс высокого выхода и воспроизводимости с низким неспецифическим связыванием, и они также могут быть использованы на приборе KingFisher, Thermo Scientific для автоматического выделения нуклеиновой кислоты. Представлены наборы для выделения геномной ДНК, свободно-циркулирующей ДНК, свободно-циркулирующей РНК, вирусной ДНК или РНК из разнообразных типов образцов.

Автоматическое выделение ДНК и РНК

Системы KingFisher, Thermo Scientific – предлагают универсальную лабораторную автоматизацию для последовательной экстракции и очистки ДНК, РНК, белков и клеток на магнитных частицах из различных стартовых материалов. Рабочие процессы системы KingFisher устраняют операции выполняемые вручную и сокращают общее время обработки по сравнению с другими системами автоматизации. Кроме того, системы предлагают оптимизированные, простые в использовании протоколы практически для каждого типа образцов.

• Различная пропускная способность - обработка от 6 до 96 образцов за прогон в зависимости от модели прибора;
• взаимозаменяемые форматы - 24-луночные или 96-луночные планшеты;
• позволяют уменьшить количество ошибок при обработке данных пользователей и повысить воспроизводимость результатов;
• простое редактирование, изменение или создание новых протоколов (сенсорный экран включен только для прибора KingFisher Apex, Thermo Scientific);
• оптимизированные реагенты;
• пластик со штрих-кодами - достижение оптимальной производительности с помощью специально сконструированного пластика (только для прибора KingFisher Apex, Thermo Scientific)

Использование систем KingFisher помогает уменьшить количество ошибок в обработке данных и повысить воспроизводимость результатов для всех прогонов и различных пользователей, что имеет решающее значение для чувствительных нисходящих приложений, таких как qPCR, NGS, цифровая PCR и масс-спектрометрия.

Комбинированный набор PureLink Quick Gel Extraction and PCR Purification Combo для быстрой экстракции ДНК из геля или очистки из ПЦР-смеси

Принцип выделения ДНК/РНК с помощью магнитных частиц

Автоматическое выделение ДНК и РНК

Прибор KingFisher Flex, для автоматического выделения ДНК/РНК, белка или клеток

Реактивы для стабилизации РНК

Получение высококачественной неповрежденной РНК является первым и часто наиболее критическим этапом в проведении анализа экспрессии генов. Для выделения высококачественной РНК образец ткани должен быть либо:

• обработан сразу после получения,
• быстро заморожен,
• стабилизирован в промежуточном растворе для сохранения целостности РНК и обеспечения возможности хранения.

Thermo FS предлагает несколько продуктов, специально разработанных для стабилизации и сохранения целостности РНК:

• раствор для стабилизации РНК RNAlater, Invitrogen стабилизирует и защищает клеточную РНК в интактных, размороженных образцах тканей, устраняя необходимость немедленной обработки образцов тканей или замораживания образцов в жидком азоте для последующей обработки. Кусочки ткани могут быть собраны и погружены в раствор для стабилизации РНК для хранения, без ущерба для качества или количества РНК, полученной после последующего выделения РНК. Преимущества использования RNAlater раствора для стабилизации РНК:
• стабилизирует РНК в течение 1 дня при 37 °C, 1 недели при 25 °C, 1 месяца при 4 °C или неопределенно долго при -20 °C;
• единый реагент, который немедленно инактивирует РНКазы и стабилизирует РНК в тканях или клетках;
• нет необходимости замораживать образцы в жидком азоте или быстро доставлять образцы в лабораторию для обработки;
• идеально подходит для сбора тканей «в поле».

• раствор RNAlater-ICE Frozen Tissue Transition, Invitrogen для стабилизации РНК в размораживаемых тканях. Замороженные ткани погружают в RNAlater-ICE и оставляют оттаивать в течение ночи при -20 °C. После оттаивания, ткани могут быть обработаны как свежие ткани с использованием стандартных процедур выделения РНК. Не требуется измельчения замороженной ткани для защиты и выделения РНК.

• пробирки Tempus, Applied Biosystems для стабилизации РНК в образцах крови для последующего анализа. Каждая пробирка содержит 6 мл стабилизирующего реагента, который эффективно лизирует клетки крови и стабилизирует РНК за одну стадию; не требуют дополнительных операций до последующего выделения РНК; сохраняют РНК до 5 дней при комнатной температуре и от 7 дней при 4°C; пробирки со образцом можно замораживать и хранить при температуре до -80°C.

Использование данных реактивов позволяет стабилизировать и сохранять целостность РНК либо в точке сбора, либо даже после сбора, что устраняет необходимость немедленной обработки полученного материала.

Раствор RNAlater для стабилизации РНК в образцах тканей

Cтабильность РНК в тканях обработанных RNAlater после нескольких циклов замораживания/оттаивания

Принцип использования раствора RNAlater

Раствор RNAlater-ICE Frozen Tissue Transition

Пробирки Tempus

Количественное определение НК

Настольные флуориметры Qubit, Invitrogene для количественного анализа ДНК, РНК, микроРНК и белка, а также для измерения целостности и качества РНК с помощью высокочувствительных и точных флуоресцентных зондов.

Принцип работы флуориметров Qubit

В образец вводится флуоресцентный зонд, который специфически связывает целевую молекулу, образуя флуоресцентный комплекс. Источник света возбуждает флуоресценцию, которая пропорциональна концентрации определяемого вещества. Прибор измеряет интенсивность свечения и рассчитывает концентрацию. Измерение проходит в обычных тонкостенных пробирках на 0,5 мл.

Преимущества:

• Более чувствителен, чем УФ-поглощение, обнаруживает всего 10 пг / мкл ДНК
• Использует всего 1 мкл образца даже для очень разбавленных образцов
• Быстрый и высокоточный количественный анализ ДНК, РНК и белка менее чем за 3 секунды на образец
• Высокий уровень точности при использовании всего 1–20 мкл образца даже для очень разбавленных образцов
• Использование красителей, селективных по отношению к дцДНК, РНК или белку, сводит к минимуму влияние загрязняющие вещества в образце
• Новый встроенный калькулятор реагентов для быстрого расчета рабочих растворов
• Гибкие возможности экспорта результатов: Wi-Fi, USB-накопитель или прямое подключение с помощью USB-кабеля.
• Высокоточный флуориметр Qubit Flex увеличивает пропускную способность, одновременно измеряя 8 образцов.

Флюорометры Qubit являются на порядок более чувствительными, чем УФ-поглощение, которое измеряет всё, что поглощающает при 260 нм - ДНК, РНК, белок, свободные нуклеотиды или избыточные соли. Кроме того, УФ-спектрофотометрии часто не хватает чувствительности для точного измерения низких концентраций ДНК и РНК, которое присутствует у флюорометров Qubit.

Флуориметр Qubit 4

Флуориметр Qubit 4 с набором реагентов для измерения концентрации ДНК или РНК

Флуориметр Qubit Flex

Обратная транскрипция

Обратная транскрипция (ОТ) — широко используемое приложение в исследованиях молекулярной биологии для изучения функций анализа экспрессии РНК. Thermo Scientific предлагает полный спектр обратных транскриптаз и наборов для синтеза кДНК, включая обратные транскриптазы SuperScript надежные и проверенные миллионами пользователей обратные транскриптазы в различных оптимизированных форматах для синтеза кДНК, для применения в приложениях ОТ-ПЦР ОТ-кПЦР и одношаговой ОТ-ПЦР.

• Обратные транскриптазы RevertAid и RevertAid H Minus, Maxima и Maxima H Minus хорошо известны пользователям, т.к. ранее производились Fermentas;
• M-MLV обратная транскриптаза, Invitrogen, не обладает эндонуклеазной активностью и имеет более низкую активность РНКазы H, может быть использована для синтеза кДНК длиной до 7 кб;
• Обратная транскриптаза SuperScript IV – наиболее эффективный в использовании фермент, включая трудные образцы и образцы с примесями ингибиторов реакции. Также представлена в формате наборов для проведения ОТ-ПЦР, ОТ-кПЦР и наборов для одностадийной ПЦР;
• Наборы и мастер-миксы для синтеза кДНК, ОТ-ПЦР, ОТ-кПЦР;
• Наборы для одностадийной ОТ-ПЦР;
• Готовые праймеры (oligo (dT)18; случайный гексамер праймер;
• Маркеры длин РНК;
• Реагенты для деконтаминации от РНКаз - RNaseZap в виде раствора и в формате салфеток RNaseZap.

Наборы и реагенты для обратной транскрипции являются превосходным выбором для обеспечения производительности и получения высокого выхода кДНК даже для самых сложных образцов.

Полимеразная цепная реакция

ПЦР является бесценным инструментом для исследований в молекулярной биологии, используемым в лабораториях по всему миру в широком спектре применений, таких как клонирование, анализ экспрессии генов, генотипирование, секвенирование и мутагенез.

Thermo FS предлагает такие продукты, как надежные амплификаторы Applied Biosystems, широкий ряд разнообразных ДНК-зависимых ДНК-полимераз: AmpliTaq и AmpliTaq Gold, Applied Biosystems, Platinum II Taq и Platinum SuperFi II, Invitrogen, DreamTaq, Fermentas и высококачественный пластик для ПЦР, Applied Biosystems.

• ДНК-зависимые ДНК полимеразы для: стандартной ПЦР, для ПЦР GC-богатых регионов, мультиплексной ПЦР, высокоточной ПЦР, амплификации длинных фрагментов, ПЦР с «горячим стартом» (Hot start ПЦР);
• Мастер-миксы для ПЦР;
• Ферменты и мастер-миксы также поставляются в предокрашенном формате для последующего нанесения на гель без выделения ПЦР-продукта;
• dNTPs, NTPs и модифицированные нуклеотиды;
• одноканальные, многоканальные, электронные дозаторы;
• лабораторный пластик: наконечники для дозаторов, 96- и 384-луночные планшеты; пленки для запечатывания планшет; пробирки, стрипы;

Ферменты, мастер-миксы и наборы для проведения ПЦР от Thermo FS подходят под разные задачи и обеспечивают успешную амплификацию для любых исследований, от рутинной ПЦР до получения ПЦР-продуктов из разрушенных образцов ДНК и детектирования однонуклеотидных полиморфизмов.

Реагент для деконтаминации от РНКаз - RNaseZap

ДНК-полимераза Platinum SuperFi II

Phusion Taq ДНК-полимеразы

96-луночные планшеты для ПЦР

Многоканальная пипетка Thermo FS

Пробирки MicroAmp 0,2 мл без крышки

Стрип 0.2 мл MicroAmp из 8-пробирок с выпуклыми крышками

ПЦР амплификаторы с функцией VeriFlex – точный контроль температуры в каждом блоке, настройка 6 независимых режимов (разница темп до 5ºС) для определения оптимальной температуры отжига в одном прогоне.

ПЦР амплификаторы Applied Biosystems позволяют получить точные, последовательные результаты для каждой задачи, применения и бюджета.

• ProFlex – высокопроизводительный термоциклер с гибкой кофигурацией, усовершенствованными параметрами и функциями контроля; имеет пять вариантов взаимозаменяемых блоков: 3 x 32-луночный блок – позволяет проводить до трех независимых экспериментов одновременно; 96-луночный блок; двойной 96-луночный и двойной 384-луночные блоки; двойной плоский блок доступен для поддержки технологии Applied Biosystems OpenArray plate для анализа генотипирования в системе QuantStudio 12K Flex Real-Time PCR System.
• ProFlex ПЦР амплификатор c 3x32-луночным блоком;
• Veriti – простой в управлении и надежный прибор, сертифицирован для диагностики in vitro;
• MiniAmp Plus, MiniAmp – компактный дизайн и простота в управлении.

Вне зависимости от выбранного прибора, каждый из амплификаторов сокращает время, затрачиваемое на оптимизацию с помощью технологии температурного контроля VeriFlex, обладает удобным для пользователя интерфейсом и имеет функцию удаленного управления.

ProFlex ПЦР амплификатор c 3x32-луночным блоком

Veriti – 96-луночный ДНК-амплификатор

MiniAmp Plus – 96-луночный ДНК-амплификатор

MiniAmp – 96-луночный ДНК-амплификатор

Температурный блок с технологией VeriFlex

Детекция и анализ

Thermo FS предлагает широкий выбор реагентов для проведения гель-электрофореза и детекции ДНК и РНК в агарозных или полиакриламидных гелях. В зависимости от задач можно выбрать реагенты для рутинного анализа разделения фрагментов ДНК и РНК, или реагенты, которые обеспечивают более высокое разрешение для детекции ПЦР-фрагментов и других коротких фрагментов ДНК.

• Маркеры длин ДНК, Thermo Scientific для точного анализа линейной двухцепочечной ДНК в агарозных или полиакриламидных гелях.
• Агарозы;
• Буферы для нанесения ДНК и РНК на гель;
• Реагенты для окрашивания агарозных и полиакриламидных гель-электрофорезов;
• Трис-ацетатные (ТАЕ) и трис-боратные (TBE) буферы для проведения гель-электрофореза;
• Оборудование для проведения гель-электрофореза;
• Система E-Gel: электорофорез НК на готовых агарозных гелях.

Маркеры длин ДНК

Реагенты для окрашивания агарозных и полиакриламидных гель-электрофорезов;

Система E-Gel

Гель-электрофорез продуктов гидролиза ДНК с окрашиванием красителем SYBR Green

FastDigest – эндонуклеазы рестрикции для быстрого гидролиза

Эндонуклеазы рестрикции FastDigest, Thermo Scientific представляют собой линейку ферментов работающих в одном универсальном буфере и гидролизующих НК от 5 до 15 минут.

Ферменты, участвующие в модификации молекул ДНК/РНК, такие как лигазы, фосфатазы, киназы и ДНК-полимеразы, полностью активны в буферных растворах FastDigest и FastDigest Green. Поэтому на последующих этапах ферменты можно сразу добавлять в реакционную смесь FastDigest. Нет необходимости в замене буфера или проведении очистки.

Эндонуклеазы рестрикции FastDigest, Thermo Scientific обладающих следующими преимуществами:

• полный гидролиз за 5–15 минут;
• число реакций не ограничено — все 176 ферментов полностью активны в одном буфере;
• не обладают неспецифической активностью;
• полная совместимость буфера с последующими операциями;
• нанесение непосредственно на гель.

На сайте Thermo FS представлен калькулятор DoubleDigest. С помощью этого инструмента легко рассчитать оптимальные условия для реакции двойного гидролиза:

• наиболее подходящий буфер для ферментативной реакции;
• необходимые концентрации ферментов;
• условия инкубации и любые добавки, необходимые для реакции двойного гидролиза.

a. Эндонуклеазы рестрикции

Полный гидролиз ДНК без звездчатой активности лучше всего достигается с помощью обычных эндонуклеаз рестрикции, Thermo Scientific с использованием одного из пяти буферов системы Five Buffer System. В портфолио Thermo FS представлено около 190 разнообразных рестриктаз. Эндонуклеазы рестрикции Thermo Scientific гидролизуют двухцепочечную ДНК в строго определенной последовательности с инвертированным повторным распознаванием от 4 до 8 пар оснований с образованием либо тупых концов, либо липких 5 ′ или 3 ′- концов.

b. Эндонуклеазы рестрикции и ДНК-модифицирующие ферменты системы Anza для клонирования

Система для клонирования Anza, Invitrogen включает в себя 128 эндонуклеаз рестрикции и 5 ДНК-модифицирующих ферментов работающих в одном буфере , что позволяет быстро и просто проводить клонирование.

Преимущества системы Anza:

• Один буфер для всех ферментов рестрикции и модификации ДНК;
• Один протокол гидролиза для всех типов ДНК;
• Полный гидролиз в течении 15 мин.;
• Ночной гиролиз без проявления звездчатой активности;
• не требуются сложные и длительные этапы промежуточной очистки продуктов реакции;
• в систему Anza входят все необходимые модифицирующие ферменты ДНК для полноценного клонирования.

Схема гидролиза 2-цепочечной ДНК эндонуклеазой рестрикции

Модель гидролиза двуцепочечной ДНК эндонуклеазой рестрикции

Пример эндонуклеаз рестрикции Thermo FS

Система для клонирования Anza

c. ДНК- и РНК-модифицирующие ферменты

ДНК/РНК модифицирующие ферменты от Thermo Scientific имеют высокое качество и чистоту, поддерживают общие модификации молекул РНК и ДНК. Эти ферменты включают фосфатазы, киназы, ДНК и РНК-полимеразы, лигазы и другие нуклеазы.

• T4 ДНК-лигаза;
• T4 РНК-лигаза;
• Щелочная фосфотаза;
• T4 полинуклеотидкиназа;
• T7 ДНК полимераза;
• Фрагмент Кленова;
• Т4 ДНК-полимераза;
• РНКаза А;
• РНКаза Н;
• ДНКаза I;
• Экзонуклеаза ExoI;
• Экзонуклеаза I;
• Экзонуклеаза III.

d. Клонирование

Молекулярное клонирование – одна из ключевых технологий в молекулярной биологии, используется для получения рекомбинантных молекул ДНК и направления их репликации. В процессе молекулярного клонирования, ДНК подлежащую клонированию, идентифицируют и гидролизуют эндонуклеазами рестрикции для получения необходимых фрагментов ДНК. Эти фрагменты затем объединяют с векторной ДНК для создания рекомбинантных молекул ДНК.

Thermo FS предлагает полное решение ферментов для клонирования, наборов, векторов и компетентных клеток.

• Ферменты для клонирования: эндонуклеазы рестрикции, эндонуклеазы рестрикции FastDigest, Thermo Scientific, система для клонирования Anza, Invitrogen, Т4 ДНК-лигаза, T4 полинуклеотидкиназа, фрагмент Кленова, Т4 ДНК-полимераза; щелочная фосфотаза;
• наборы для лигирования;
• наборы TOPO, Invitrogen для клонирования ПЦР-фрагментов позволяет проводить реакции клонирования всего за пять минут при комнатной температуре, не требуются лигазная сшивка, достигается эффективность клонирования - 95%. Благодаря разнообразию форматов: наборы с компетентными клетками или наборы без компетентных клеток, наборы для клонирования ПЦР-фрагметов с липкими или с тупыми концами, можно выбрать набор для любого применения и различных последующих приложений.
• наборы aLICator LIC, Thermo Scientific для безлигазного клонирования;
• наборы CloneJET, Thermo Scientific предначен для проведения клонирования ПЦР-фрагментов как с липкими, так и с тупыми концами за 5-15 минут при комнатной температуре. В состав набора входит вектор для клонирования, содержащий ген, с помощью которого проводится селекцию, необходимых клонов, дополнительная бело-голубая селекция не требуется;
• технология клонирования Gateway, Invitrogen;
• наборы GeneArt Seamless Cloning и GeneArt Gibson Assembly предназначены для одновременной сборки до 15 фрагментов ДНК для создания точных, очень крупных конструкций без включения нежелательных последовательностей. Эти методы клонирования заменяют реакции гидроза эндонуклеазами рестрикции, дефосфорилирования, лигирования, инактивации, очистки реакционной смеси, что экономит 3-4 недели по сравнению с традиционными методами клонирования с использованием ферментов.
• наборы для клонирования с компетентными клетками;
• набор для быстрой достройки концов ДНК;
• компетентные клетки.

Ферменты для клонирования

Чашка Петри с LB-агаром, показывающая результат бело-голубой селекции

Наборы GeneArt Seamless Cloning и GeneArt Gibson Assembly

e. Прямая ПЦР

Мастер-миксы Direct PCR предназначены проведения ПЦР из неочищенных образцов. Небольшое количество исходного материала используется в реакции ПЦР без предварительной стадии выделения и очистки ДНК/РНК, обеспечивая значительную экономию времени и уменьшая стоимость эксперимента. Мастер-миксы содержат буфер для нанесения на гель с двумя красителями, который позволяет напрямую наносить ПЦР-продукты на гель.

• Мастер-микс Platinum Direct PCR, Invitrogen для прямой ПЦР из разнообразных образцов: образцы животных, человека, растений, насекомых, червей и бактерий;
• Мастер-микс Phire Plant Direct PCR, Thermo Scientific предназначен для амплификации ДНК непосредственно из образцов растений;
• Мастер-микс Phusion Blood Direct PCR, Thermo Scientific предназначен для амплификации ДНК непосредственно из цельной крови;
• Мастер-микс Phire Tissue Direct PCR, Thermo Scientific предназначен для амплификации ДНК непосредственно из широкого спектра тканей, полученных от мышей, человека, рыб, птиц и насекомых;
• Набор Phusion Human Specimen Direct PCR, Thermo Scientific из неочищенных образцов человека: щечные мазки, слюну, амниотическую жидкость, волосы, ногти, зубы и биопсии кожи. Набор совместим со свежими, замороженными и даже FFPE-образцами тканей человека.

f. Обратная транскрипция и кПЦР без выделение РНК из клеток

• Набор SuperScript IV CellsDirect cDNA Synthesis, Invitrogen для прямого синтеза кДНК оптимизирован для синтеза кДНК первой цепи непосредственно из клеточного лизата без предварительного выделения РНК. Лизис клеток и обратную транскрипцию осуществляют в одной и той же пробирке, и полученная кДНК первой цепи готова к использованию в ПЦР и кПЦР.
• Наборы Cells-to-CT, Invitrogen предназначены для анализа экспрессии генов без предварительного выделения РНК из образца. Наборы содержат реагенты для лизиса клеток, обратную транскриптазу, мастер-миксы для кПЦР. Cells-to-CT поставляются в различных вариантах: для 1-ступенчатой или 2-ступенчатой ОТ-кПЦР, с TaqMan или SYBR.
• Наборы для 1-шаговой ОТ-кПЦР Cells-to-CT 1-step с красителем TaqMan или SYBR Green;
• Наборы для 2-шаговой ОТ-кПЦР (лизис клеток-ОТ-кПЦР): Fast Advanced Cells-to-CT с красителем TaqMan или SYBR Green и Cells-to-CT с красителем TaqMan или SYBR Green;
• Набор Single Cell-to-CT, Ambion предназначен для анализа экспрессии генов для образцов содержащих 1-10 клеток. В составе набора реагенты для подготовки образца, обратной транскрипции и кПЦР.

Прямая ПЦР - постановка реакции без выделения нуклеиновой кислоты из образца

Сравнение методов традиционной ПЦР и прямой ПЦР

Набор SuperScript IV CellsDirect cDNA Synthesis, Invitrogen

Наборы Cells-to-CT, Invitrogen

Таким образом Thermo FS предлагает комплексный выбор реагентов и наборов для успешного выделения, очистки, обнаружения, анализа ДНК и РНК, для проведения ПЦР и обратной транскрипции.

Все реагенты и наборы являются сверхчистыми и сертифицированы для использования в молекулярной биологии.

Здесь вы можете задать вопрос или оставить запрос в свободной форме