Экстра-микс HS-Taq Color представляет собой 2-кратную реакционную смесь, содержащую все компоненты, необходимые для проведения ПЦР (исключая ДНК-матрицу и праймеры):
- высокопроцессивную рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу с "горячим" стартом;
- смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов;
- ПЦР-буфер;
- Mg2+;
- красители.
Экстра-микс оптимизирован для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР c “горячим” стартом; он химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристик плавления матрицы. В его состав входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность
HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР.
Увеличивающие плотность пробы компоненты и красители позволяют наносить реакционную смесь сразу на гель после амплификации для удобства работы с ней.
Форма реагентов для проведения ПЦР в виде экстра-микса экономит время и снижает вероятность контаминации за счет малого числа шагов пипетирования.
HS-Taq ДНК-полимераза, входящая в состав экстра-микса, неактивна при температуре ниже +70
оС. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при +95 °С в течение 5 мин. Рекомбинантная
HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной
Taq ДНК-полимеразы из
Thermus aquaticus. Скорость продвижения
Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная
HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; она обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.
Кроме экстра-микса, в состав набора также включены 50 мМ
MgCl2 и стерильная вода. Входящий в набор раствор MgCl
2 позволяет легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему "матрица-праймеры".
Состав набора
|
Кат. №
|
Кол-во реакций по 50 мкл
|
HS-Taq Color (2х)
|
50 мМ MgCl2
|
Вода
|
|
1961.0200
|
200
|
4 х 1.25 мл
|
1 х 1 мл
|
4 х 1.25 мл
|
|
1961.1020
|
1020
|
17 х 1.5 мл
|
2 х 1.8 мл
|
|
Состав экстра-микса HS-Taq Color (2х):
- 100 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С);
- 100 мM KCl;
- 0,4 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
- 4 мМ MgCl₂;
- 0,06 ед. акт./мкл HS-Taq ДНК-полимеразы;
- 0,2% Tween 20;
- стабилизаторы HS-Taq ДНК-полимеразы;
- красители.
Преимущества использования экстра-микса HS-Taq Color с Taq-полимеразой с "горячим" стартом:
- Фермент с “горячим” стартом повышает специфичность, чувствительность и выход реакции.
- Для активации HS-Taq ДНК-полимеразы требуется не более 5 мин.
- Сокращается время на подготовку реакции.
- Снижается вероятность контаминации при смешивании компонентов ПЦР.
- Стандартизируются условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
- Возможно использование в широком спектре видов ПЦР.
- Возможность ТА клонирования продуктов ПЦР за счет выступающих на концах амплифицированных фрагментов ДНК дезоксиаденозиновых остатков.
- Удобство нанесения проб на гель после амплификации благодаря высокой плотности смеси и наличию красителя
Область применения:
- ПЦР с “горячим” стартом.
- Высокопроизводительная ПЦР.
- Обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью.
- Наработка ПЦР-продуктов для ТА клонирования.
- ОТ-ПЦР.
Ограничения к использованию:
- Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 т.п.о.
- Из-за содержания красителя не рекомендуется использовать для ПЦР в режиме реального времени и других приложений, требующих измерения оптической плотности или флуоресценции пробы. Для таких приложений рекомендуется использовать смеси HS-qPCR или HS-qPCR SYBR Blue.
Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.
Срок хранения и транспортировка:
1 год при -20 °С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.
